地表水中快速檢測(cè)糞大腸菌群的方法

  想要知道地表水是否受到了糞水污染以及污染的程度如何，糞大腸菌群是一項(xiàng)非常重要的參數(shù)。因此如何能夠快速、可靠、準(zhǔn)確的檢測(cè)出糞大腸菌群含量對(duì)水質(zhì)健康具有重要意義。

  今天我們要講的是通過光度法快速檢測(cè)地表水中糞大腸菌群的操作方法，此方法原理是通過一定量的水樣與選擇性培養(yǎng)基混合均勻放置于44.5℃環(huán)境下，糞大腸菌群產(chǎn)生β-半乳糖苷酶，并分解色原底物釋放出色原體使培養(yǎng)基呈現(xiàn)顏色變化，通過連續(xù)分光光度（波長：300nm～600nm）測(cè)定，依據(jù)待測(cè)水樣色度變化與水中糞大腸菌群數(shù)成一定關(guān)系的原理，得出糞大腸菌群濃度。

檢測(cè)時(shí)的干擾及消除

1.活性氯具有氧化性，能破壞微生物細(xì)胞內(nèi)的酶活性，導(dǎo)致細(xì)胞死亡，可在水樣采集時(shí)加入硫代硫酸鈉溶液消除干擾。

2.重金屬離子具有細(xì)胞毒性，能破壞微生物細(xì)胞內(nèi)的酶活性，導(dǎo)致細(xì)胞死亡，可在水樣采集時(shí)加入乙二胺四乙酸二鈉溶液消除干擾。

檢測(cè)所需試劑

1.糞大腸菌群檢測(cè)試劑主要成分：

——蛋白胨：5g；

——硫酸錳：0.005g；

——硫酸鎂：0.001g；

——硫酸鋅：0.001g；

——磷酸鹽：1.78g；

——兩性霉素B：0.60g；

——蒸餾水1000mL。

制法：上述試劑溶于蒸餾水中，充分混勻，調(diào)整pH值為7.2～7.4，68.95kPa(115℃)，高壓滅菌20min，分裝貯存于4℃避光備用。也可采用市售商品化培養(yǎng)基制品。

2.硫代硫酸鈉。

3.乙二胺四乙酸二鈉。

4.硫代硫酸鈉溶液：0.10g/mL，

  稱取15.7g硫代硫酸鈉，溶于適量水中，定容至100mL，臨用現(xiàn)配。

5.乙二胺四乙酸二鈉溶液：0.15g/mL，稱取15g乙二胺四乙酸二鈉，溶于適量水中，定容至100mL，此溶液保質(zhì)期為30d。

6.無菌水：取適量純水，經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌20min，備用。

檢測(cè)所需儀器

1.采樣瓶：具螺旋帽或磨口塞的100mL、250mL、500mL廣口玻璃瓶。

2.微生物快速檢測(cè)儀：

——恒溫培養(yǎng)單元：不少于2個(gè)溫控系統(tǒng)，溫度控制精度1℃，可自動(dòng)調(diào)節(jié)待檢測(cè)樣本培養(yǎng)溫度（44.5℃±1℃）；

——檢測(cè)單元：不少于4個(gè)獨(dú)立的檢測(cè)系統(tǒng)，可實(shí)現(xiàn)多個(gè)樣本的同時(shí)監(jiān)測(cè)；

——數(shù)據(jù)顯示、處理單元：自動(dòng)輸出檢測(cè)結(jié)果，可查詢和顯示歷史數(shù)據(jù)。

3.高壓蒸汽滅菌器：121℃可調(diào)、101.3kpa。

4.量筒：50mL、100mL。

5.移液管：1mL、10mL。

6.天平：感量0.01g。

水樣采集與保存

采集方法

  點(diǎn)位布設(shè)及采樣頻次按照相關(guān)國家標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。與其它項(xiàng)目一同采樣時(shí)，先單獨(dú)采集微生物樣品，采樣瓶不得用水樣洗滌，采集水樣于滅菌的采樣瓶中。

  采集河流、湖庫等地表水樣時(shí)，可握住瓶子下部直接將帶塞采樣瓶插入水中，約距水面10cm-15cm處，瓶口朝水流方向，拔玻璃塞，使水樣灌入瓶內(nèi)然后蓋上瓶塞，將 采樣瓶從水中取出。如果沒有水流，可握住瓶子水平往前推。采樣量一般為采樣瓶容量的80%左右。采好水樣后，迅速扎上無菌包裝紙。

  采集地表水、廢水樣品及一定深度的水樣時(shí)，可使用滅菌過后專用采樣裝置采樣。在同一采樣點(diǎn)進(jìn)行分層采樣時(shí)，應(yīng)自上而下進(jìn)行，避免不同層次的攪擾。

  如果采集的是含有活性氯的樣品時(shí)，需在采樣瓶滅菌前加入硫代硫酸鈉溶液，以除去活性氯對(duì)細(xì)菌的抑制作用(每125mL容積加入0.1mL的硫代硫酸鈉溶液)；如果采集的是重金屬離子含量較高的樣品，則在采樣瓶滅菌前加入乙二胺四乙酸二鈉溶液，以消除干擾（每125mL容積加入0.3mL的乙二胺四乙酸二鈉溶液）。

保存方法

  采樣后應(yīng)在2h內(nèi)檢測(cè)，否則，應(yīng)10℃以下冷藏但不得超過6h。實(shí)驗(yàn)室接樣后，不能立即開展檢測(cè)的，將水樣于4℃以下冷藏并在2h內(nèi)檢測(cè)。

檢測(cè)步驟

接種

  接種待測(cè)水樣于裝有5mL培養(yǎng)基的檢測(cè)瓶中，定容至20mL，水樣與培養(yǎng)基應(yīng)充分混勻。

培養(yǎng)

  打開儀器電源開關(guān)，待儀器穩(wěn)定30 min后，將接種后的檢測(cè)瓶放置于微生物快速檢測(cè)儀中，按照儀器說明書進(jìn)行操作，設(shè)置檢測(cè)溫度為44.5 ℃，點(diǎn)擊“檢測(cè)”按鈕，2-18小時(shí)，儀器自動(dòng)培養(yǎng)得出結(jié)果。

空白對(duì)照實(shí)驗(yàn)

  采用無菌水作為待測(cè)水樣按照接種和培養(yǎng)的操作步驟進(jìn)行空白測(cè)定，測(cè)試結(jié)果不得檢出，否則該次樣品測(cè)定結(jié)果無效，應(yīng)重新測(cè)定空白以及待測(cè)樣品。

陰性及陽性對(duì)照

  將標(biāo)準(zhǔn)菌株制成300-3000個(gè)/mL的菌懸液，將菌懸液按接種和培養(yǎng)要求操作，陽性菌株應(yīng)呈現(xiàn)陽性反應(yīng)；陰性菌株呈現(xiàn)陰性反應(yīng)，否則，該次樣品測(cè)定結(jié)果無效，應(yīng)重新測(cè)定。

  糞大腸菌群的陰性、陽性菌株可以參考相關(guān)的參照表

 

以上內(nèi)容來源于《DB37/T 3787—2019 水質(zhì) 糞大腸菌群測(cè)定 光度法》