測定BOD5時水樣稀釋法分一般稀釋法和直接稀釋法兩種，其中一般稀釋法需要使用的稀釋水或接種稀釋水數(shù)量較多。
一般稀釋法是在1L或2L量筒中，加入稀釋水或接種稀釋水約500mL，然后加入計算而得的一定體積的水樣，再加稀釋水或接種稀釋水到滿量程，用末端裝有橡皮圓片的玻璃棒在水面下慢慢作上提或下沉式攪動，最后用虹吸管將已經(jīng)混合均勻的水樣溶液引入培養(yǎng)瓶中，并使充滿溢出少許，小心蓋緊瓶塞，并水封瓶口。對第二或第三個稀釋倍數(shù)的水樣，可利用剩余的混合液，經(jīng)計算后在添加一定量的稀釋水或接種稀釋水，用同樣的方法混合并引入培養(yǎng)瓶。
直接稀釋法是先以虹吸法在已知容積的培養(yǎng)瓶中引入約一半容積的稀釋水或接種稀釋水，然后沿瓶壁注入根據(jù)稀釋倍數(shù)計算出的每一培養(yǎng)瓶中應加入的水樣體積，再引入稀釋水或接種稀釋水至瓶頸，小心蓋緊瓶塞，并水封瓶口。
使用直接稀釋法時，特別要注意最后引入稀釋水或接種稀釋水時一定不能過快。同時要摸索引入最適體積的操作規(guī)律，避免過量溢出而產(chǎn)生的誤差。
無論使用哪中方法，在將水樣引入培養(yǎng)瓶時，動作必須要輕緩，避免發(fā)生氣泡，以防空氣溶入水中或水中氧氣溢出。同時要保證在蓋緊瓶蓋時一定要細心，避免瓶內(nèi)留有氣泡而影響測定結果。培養(yǎng)瓶在培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)時，每天都要檢查其水封情況，及時填水，以防止封口水份蒸干而使瓶內(nèi)進入空氣。此外，5d前后使用的兩個培養(yǎng)瓶的體積必須相同，以減小誤差。
